The Korean Society For Biotechnology And Bioengineering
[ Review Paper ]
Korean Society for Biotechnology and Bioengineering Journal - Vol. 33, No. 2, pp.70-75
ISSN: 1225-7117 (Print) 2288-8268 (Online)
Print publication date 30 Jun 2018
Received 04 Apr 2018 Revised 02 May 2018 Accepted 02 May 2018
DOI: https://doi.org/10.7841/ksbbj.2018.33.2.70

다발성경화증 치료를 위한 인터페론 베타의 산업적 생산

손다진1 ; 김종석1 ; 박재범1 ; 권덕호1 ; 정형무2 ; 한상인2 ; 홍억기1 ; 하석진1, *
1강원대학교 생물공학과
2한국코러스제약
Industrial Production of Interferon Beta for the Treatment of Multiple Sclerosis
Da-Jin Son1 ; Jong-Seok Kim1 ; Jae-Bum Park1 ; Deok-Ho Kwon1 ; Hyung-Moo Jung2 ; Sang-In Han2 ; Eock-Kee Hong1 ; Suk-Jin Ha1, *
1Department of Bioengineering and Technology, Kangwon National University, Chuncheon 24341
2Hankook Korus CO., LTD, Chuncheon 24398

Correspondence to: Department of Bioengineering and Technology, Kangwon National University, Chuncheon 24341, Korea Tel: +82-33-250-6278, Fax: +82-33-243-6350 e-mail: sjha@kangwon.ac.kr


© 2018 The Korean Society for Biotechnology and Bioengineering

Abstract

Multiple sclerosis is a chronic disorder commonly occurred in the central nervous system and is an autoimmune disease. Corticosteroids are used as a short-term treatment for multiple sclerosis, but they cause side effects. Therefore, interferon beta having antiviral and anti-inflammatory effects, is used for long-term treatment. Interferon beta-1a, produced in Chinese hamster ovary cells, is glycosylated upon biosynthesis and forms glycoform, which is similar to naturally occurring protein. However, its process has disadvantages such as slow cell growth, low yield and high contamination possibility. Also, recombinant Escherichia coli is widely used for the production of interferon beta-1b due to its rapid growth and easy process scale up, but it lacks post-translational modification, leading to low activity. In addition, the produced Interferon beta-1b might cause protein aggregation due to misfolding. Alternatively, yeast can be used as a production host possessing N-glycosylation activity. Therefore, the choice of expression system in the production of interferon beta should be carefully selected in relation to the quality and yield.

Keywords:

multiple sclerosis, interferon beta, industrial production

1. INTRODUCTION

1.1. 다발성경화증이란?

다발성경화증 (multiple sclerosis, MS)은 중추 신경계 (central nervous system)에서 흔히 보이는 만성 장애이며, 신경 조직에서 자가면역과 관련된 염증의 결과로 추정된다 [1,2]. 미국에서는 약 25~35만명의 환자가 다발성경화증을 앓고 있으며 [3], 유럽에서는 성인 인구의 0.05~0.1%에 영향을 미치고, 유병률은 100,000명 당 평균 83명이다 [4]. 이 질병은 남성보다 여성에게 더 많이 감염되는 것으로 알려져 있으며, 북유럽 출신의 사람들이 이 질병에 대한 위험이 가장 높은 것으로 나타났다 [5]. 다발성경화증의 메커니즘은 잘 알려져 있지 않지만, 여러 환경적 및 유전적 요인이 미엘린 수초 (myelin)에 자가면역 세포의 활성화를 유발한다고 알려져 있다. 이러한 자가면역 세포는 혈액 뇌관문 (Blood-brain-barrier)에 침투하며, 다발성경화증의 임상 증후로 나타난 뉴런에 탈 수초를 일으킨다 [6,7]. 이 질환의 특징은 초기에 신경학적 결손이 일어나며, 시간이 지남에 따라 점진적으로 신경학적 저하가 뒤따른다.

1.2. 환자의 질병 경과에 따른 네 가지 범주 분류 [2]

재발-완화 다발성 경화증: 가장 흔한 형태로 다발성경화증 환자의 약 85%에 해당된다. 증상이 호전되거나 사라질 때 재발이 일어나는 경우 해당된다.

이차 진행성 다발성 경화증: 재발-완화 다발성 경화증 일부 환자에서 발생할 수 있으며, 환자에게 질병 치료제를 투여하면 진행을 지연시키는데 도움이 된다. 완화 또는 안정화 기간에 상관 없이 질병이 계속 악화된다.

일차 진행성 다발성 경화증: 다발성 경화증 환자의 약 10%에 영향을 미친다. 처음부터 증상이 점차적으로 악화되며, 재발이나 호전은 없지만 가끔 안정기가 있을 수 있다. 이 형태의 다발성 경화증은 질병 치료에 일반적으로 사용되는 약물에 내성이 있을 수 있다.

진행성-재발 다발성 경화증: 희귀한 형태로 환자의 5% 미만이 이에 속한다. 처음부터 점차적으로 증상이 악화되며 간헐적인 재발로 진행된다.

다발성경화증은 미엘린 수초와 희소돌기아교세포 (oligodendroglia) 영역의 손실과 함께 림프구와 대식세포를 포함한 염증 세포의 침윤이 일어난다. 때문에 환자의 30% 이상이 다리에서 중증 이상의 경련이 일어난다. 또한, 다발성경화증의 공통적 증상은 다리 한쪽에 무감각이 오며 골반, 복부 또는 흉부로 이어져 올라오고 다른 골격에도 증상이 퍼진다. 이러한 감각 장애는 보통 해결할 수 있지만 때로는 만성적인 신경병성 통증으로 이어진다. 다발성경화증의 또 다른 징후는 시력의 부분적 또는 완전 상실이며, 방광 기능 장애는 다발성경화증 환자의 90% 이상에서 발생한다.

1.3. 다발성경화증의 치료법

다발성경화증 환자에 대한 치료의 목표는 급성 악화의 지속기간 단축, 빈도 감소, 증상 완화이며 증상 치료는 기능을 유지하고 삶의 질을 향상시키는데 목적이 있다 [5]. 현재 다발성경화증에 대한 정확한 치료법은 없지만 FDA 승인을 받은 8개의 치료제가 있으며, 이 치료제 들은 재발성 다발성경화증 환자의 질병 활성 및 진행을 감소시킬 수 있다 (Table 1) [8]. 특히, 코르티코스테로이드 (corticosteroid)는 단기간 동안에 빠른 효능을 나타내기 때문에 급성 재발 환자의 치료에 사용되며, 부작용으로는 부종, 체중 증가, 위장 장애, 정서적 불안정 등이 있다 [5,9,10]. 또한 장기간 투여 시 골다공증, 뇌하수체 및 부신 기능 억제 등의 심각한 작용을 초래할 수 있다. 따라서 장기적인 치료일 경우에는 FDA에서 승인된 다발성경화증 치료제인 인터페론 베타 (interferon beta, IFN-β)가 주로 사용되며, 좋은 관용성 (tolerability)과 안정성을 보여주고 있다.

8 types of multiple sclerosis medicines approved by the FDA

인터페론 베타는 항 바이러스 및 항 염증 효과를 가지며, 이로 인해 다발성경화증에서 보이는 비정상적인 면역반응을 조절한다. 특히, 인터페론 베타를 이용한 치료제 4가지 (Avonex, Rebif, Betaseron, Extavia)는 면역 세포에서 자연적으로 분비되는 사이토카인을 이용한다 [5,6]. 인터페론 베타는 생산 방법에 따라 인터페론 베타-1a (interferon beta-1a, IFN-β-1a), 인터페론 베타-1b (interferon beta-1b, IFN-β-1b)로 나뉜다. 인터페론 베타-1a는 CHO (Chinese hamster ovary) cell을 이용하여 생산되며, 인터페론 베타-1b는 Escherichia coli를 이용하여 생산된다. 미토콘드리아에서 인터페론 베타의 작용기작은 알려져 있지 않지만, 사이토카인이 면역계에서 조절 기능을 수행하며 항 염증적 특성이 다발성경화증에 이로울 것이라 추측된다 [5]. 인터페론 베타는 재발-완화 다발성경화증 환자에게 권장되며, 질병의 재발 빈도를 약 3분의 1로 줄여준다 [11,12]. 무작위 이중 맹검, 위약 대조 시험에서 다발성경화증 환자에게 인터페론 베타를 사용했을 때, 뇌 MRI 검사결과에서 염증성 병변이 50~80% 정도 감소한다고 보고되었다 [13-15].


2. 본론

2.1. 동물세포 배양을 통한 인터페론 베타의 생산

상업적인 치료용 단백질 생산에 있어 다양한 동물 세포주가 이용되고 있으며 주로 HEK 293, BHK-21, CHO, 쥐 골수종 림프구 세포 주 등이 이용된다 [16]. 현재 치료용 단백질 제품의 50% 이상이 동물 세포주를 사용하여 생산되고 있으며, 이러한 발현 시스템은 다른 발현 시스템에 비해 많은 이점을 가지고 있다 [16,17]. 특히, 재조합 단백질의 번역 후 변형 (posttranslational modification) 시스템이 포함돼 있어 재조합 단백질을 자연 발생 단백질과 매우 유사하게 만들 수 있다 (Fig. 1) [18]. 실제로, CHO 세포주는 재조합 인간 인터페론 베타-1a의 생산에 주로 사용되며 생산성을 높이기 위해 다양한 연구가 진행되고 있다 [19,20]. CHO 세포주에서 재조합 인간 인터페론 베타를 생합성할 때 당화가 일어나 glycoform을 형성하며 다양한 생체 내 바이오 분석을 통해 인터페론 베타-1a glycoform의 물리 화학적 및 생물학적 특성을 분석한 결과, 모든 glycoform은 생물학적 활성을 지니고, 높은 antennary glycoform으로 인터페론 베타의 생물학적 활성을 조절하는데 중요한 역할을 하는 것으로 나타났다 [21].

Fig. 1.

Illustration of a typical process to develop mammalian and E. coli cell line for recombinant protein manufacturing.

CHO 세포 배양에서 재조합 인간 인터페론 베타를 효율적으로 생산하기 위해서는 배양 중에 발생하는 인터페론 베타의 분자응집을 최소화해야 한다. 이를 해결하기 위해, CHO 세포 배양에서 재조합 인간 인터페론 베타 생성과 분자응집에 대한 과민성 및 저온에 대한 영향을 연구하였다. 그 결과, 고 삼투압 (470 mOsm/kg)과 저온조건 (32oC)은 재조합 인간 인터페론 베타의 생산성을 증가시켰다 [22]. 또한, 배지 첨가제 및 온도조건이 IFN생산, 안정성 및 당화에 미치는 영향을 알아보기 위한 연구를 하였다. 연구결과, NaBu (sodium butyrate) 및 DMSO를 첨가하면 높은 생산성을 갖지만 성장률이 감소하여 최종적인 인터페론 베타가 감소하였고, 글리세롤을 첨가하면 세포 성장 속도는 감소하지만 분자응집도 함께 감소되는 것으로 나타났다 [23]. 기존배지에 sodium butyrate 또는 sodium chloride를 보충하여 실험한 결과, 인터페론 베타의 생산성이 증가하였다. 그러나, sodium butyrate는 복합체 N-linked glycan의 비율이 증가함에 따라 glycosylation profile을 변화시키는 것으로 나타났다. 배양 온도 조건에서는, 온도조건을 37oC에서 30oC로 변화시켰을 때, 37oC 배양조건에 비하여 인터페론 베타의 당화가 일정하게 유지되며, 총 생산성이 증가하고 응집체가 감소하였다 [24]. 다음으로, 세포의 고밀도 배양에 적합한 마이크로 캐리어 Cytopore 1, 2를 사용하여 연구를 진행한 결과, 현탁 배양에 비하여 세포 성장속도는 감소하였으나 인터페론 베타의 수율은 3배, 특정 단백질 생산성은 5배가 증가하였다. 마이크로 캐리어를 사용한 배양은 glycosylation profile 결과의 차이가 없었으나, 응집이 적고 glycosylation profile에 영향을 주지 않으면서 재조합 당단백질 생산을 향상시켰다 [25].

유전자의 돌연변이 또는 유전자 삽입을 통해 응집을 개선하는 연구가 진행되었다. 인터페론 베타에 부위 특이적 돌연변이를 유발하여 추가적인 당화를 도입하는 방법으로, 기존의 80번째 아미노산에 존재하는 N-glycoylation 외에 다른 돌연변이를 통하여 25번째 아미노산에 추가로 N-glycosylation 위치를 붙였다. 그 결과, 안전성이 개선됐으며 응집이 감소하고 반감기가 증가하였다 [26]. 인터페론 베타 유전자는 인트론 서열이 결여돼 있으며, 발현 경로를 지나는 동안 스플라이싱 (splicing) 과정을 하지 않는다는 특징이 있다. 그러나, PremRNA molecule의 nuclear processing이 종종 재조합 molecule의 생산 수율을 향상시키는 것으로 나타났다. 따라서, 인터페론 베타 유전자 내의 다른 위치에 이종 인트론 서열을 삽입하고 단백질 생산에 대한 영향을 분석하는 연구를 하였다. 연구결과, FISH (fluorescent in situ hybridization) 분석을 통해 인트론 서열의 삽입이 인터페론 단백질 발현 효율을 향상시킨다는 것을 확인하였다 [19].

동물세포를 사용하여 치료용 재조합 인간 인터페론 베타를 생산하는 경우, 재조합 세포의 성장 속도가 느리고, 정제된 단백질 제제에서 종양 또는 바이러스 DNA의 오염 가능성이 있다. 또한, 낮은 생산 수율과 복합 배양 조건과 같은 특정한 제한이 있어 최종 제품의 비용이 상승하게 된다 [27,28].

2.2. 미생물 배양을 통한 인터페론 베타 생산

대장균 발현시스템을 이용한 재조합 인간 인터페론 베타-1b의 생산은 이미 널리 보고되어 있다. 그러나, 이 발현시스템을 사용하면 번역 후 변형의 부재, 재조합 인간 인터페론 베타의 낮은 생물학적 활성 및 낮은 수율 등의 단점을 갖는다. 특히, 대장균에서의 재조합 인간 인터페론 베타의 과발현은 단백질이 inclusion body의 형태로 잘못 접히게 되어 단백질의 응집을 일으키는 것으로 알려져 있다 (Table 2) [29].

Examples of Strategies for Engineering of Therapeutic Proteins

Inclusion body로 발현되는 문제점을 해결하기 위해, 변성제에 의한 inclusion body의 가용화를 진행한 다음 변성제의 제거를 통해 inclusion body를 재접힘 하는 연구가 진행되었다. 이 과정에서, 재조합 인간 인터페론 베타의 회수율을 높이기 위해 불순물을 제거하는 등 공정 제어 전략이 사용되었다. 또한, 대장균에서의 발현을 높이기 위해 코돈을 치환하였고, rifampicin을 200 ug/L의 농도로 첨가하여 재조합 인간 인터페론 베타의 발현을 증가시켰다. 그리고, 세척 단계에서 0.75% Triton X-100 및 2 M 요소를 사용해 78%의 단백질을 세척하고, 고압 diafiltration 방법을 통하여 99% 이상의 순도를 가진 정제된 재조합 인간 인터페론 베타 34%를 얻었다 [30]. 강력한 변성제를 사용하지 않고 inclusion body를 재접힘하는 연구도 진행되었다. 이 연구에서는 pH 12 조건에서 비 변성제를 사용하였으며, inclusion body로부터 재조합 인간 인터페론 베타를 용해시키기 위해 inclusion body 와 비 변성제를 반응시켰다. 비 이온성 및 pH 비 민감성 Zwittergent 3-14를 사용하여 inclusion body를 용해시킨 후, pH 12로 pH를 조절한 다음 pH 8.0로 낮춰 주었다. 그 후, 생성된 상층액을 다양한 크로마토그래피 분석을 통하여 인터페론 베타 유무를 확인하였다 [31]. 더 높은 수율과 적합한 생물학적 활성을 갖는 생성물을 얻기 위해, 인간 인터페론 베타 정제를 최적화하였다. 그 결과, 0.5 M Triton X-100 버퍼를 사용했을 때 inclusion body 회수율이 가장 좋았으며, 2 M 요소와 0.6 M L-Arginine을 함유하는 완충액에서는 재접힘 효율이 높은 것으로 나타났다 [32].

대장균을 이용한 순도 높은 인터페론 베타 생산은 정제된 단백질에 독성 물질 (대장균 세포벽 유도체)의 존재를 포함한다는 단점을 갖고 있다. 높은 세포 밀도에서 성장하는 대장균에서 재조합 플라스미드의 불안정성 또한 표적 단백질의 수율을 낮추는 주요한 요인으로 인식되고 있다 [29,33].

몇몇 연구자들은 재조합 인간 인터페론 베타의 발현과 생산을 위해 효모를 사용하였다. 연구자들은 효모균주인 Pichia pastoris를 이용하여 인간 인터페론 베타를 발현하는 연구를 진행하였다. 인간 인터페론 베타와 동일한 N-말단 서열을 가지고 있는 재조합 인간 인터페론 베타를 정제하고 활성을 측정한 결과, (2~3)×107 i.u./mg의 인간 인터페론 베타가 검출되었다. 이 때, 분비된 재조합 단백질은 부분적으로 N-glycosylation된 것으로 보고되었다 [34]. 효모 발현 시스템은 짧은 배양시간과 배양 배지에서 효모 세포의 빠른 성장 그리고 쉬운 유전자 조작 및 번역 후 변형된 (당화된) 단백질을 생산하기 위한 당화 시스템의 존재 등 다른 진핵세포 발현시스템에 비해 많은 이점을 가지고 있다 [35-38]. 그러나, 이 발현 시스템의 사용은 약물로서 사용될 때 생물학적 성질에 악영향을 미칠 수 있다. 예를 들어, 표적 단백질이 과다 또는 부적절한 당화가 되거나 [5], 높은 수준의 외래 단백질의 발현이 세포의 스트레스 반응을 유도하여 기질에 대해 경쟁 또는 간접적으로 대사를 방해함으로써 다른 세포 성장 과정을 직접적으로 제한할 수 있다. 이러한 제한은 숙주에 높은 삼투압, 낮은 pH 및 낮은 온도와 같은 상이한 환경 스트레스가 가해질 때 나타날 수 있다 [37].

2.3. 인터페론 베타 분리 정제

인터페론 베타를 치료제의 원료로 사용하기 위한 전제 조건은 충분한 단백질 양과 높은 순도이며, 단백질의 양과 순도를 유지하며 장기 보존에 적합하게 제형화 되어야 한다. 인터페론 베타는 불안정하여 펩타이드 결합의 절단, 탈 아미드화, 메티오닌의 메티오닌 설파이드로의 산화, 디설파이드 교환과 같은 분해 반응을 일으킨다 [39]. CHO cell과 미생물에서 생산된 인터페론 베타의 분리 및 정제는 유사한 방법으로 진행되며, 크로마토그래피 및 전기 영동 기술에 의해 진행된다 (Table 3) [40,41]. 인터페론 베타의 정제는 다양한 컬럼을 사용하여 연구되었다. 한 연구에서는, 인터페론 베타가 sodium phosphate 완충액의 pH 구배 (9.3~11.3)인 양이온 교환 컬럼을 이용하여 용출되었으며 정제 결과, 90%의 순도가 보고되었다 [42]. 또 다른 연구에서는 친화성 성질을 이용한 Blue-Sepharose Fast Flow gel을 이용한 정제를 이용하여 다양한 완충액을 사용하여 컬럼으로부터 단백질을 용출하였으며, 93.5%의 순도가 보고되었다. 전체 공정에서 컬럼 온도와 유속은 20oC와 1 mL/min으로 유지되었다 [32].

Immunoaffinity purification of human IFN- β from MEIF-CHO cells

단일 컬럼 정제 외에도 다양한 컬럼을 사용하여 정제하는 연구가 진행되었다. Blue Sepharose resin을 이용하여 유속 120 L/h으로 세척 버퍼 및 용출 버퍼를 처리했을 때, 60% 정제 수율이 보고되었고 인터페론 베타의 소수성 성질을 이용한 Butyl Sepharose FF를 이용하여 세척 유속 22.8 L/h, 용출 유속 2.28 L/h로 컬럼 세척과 용출을 진행 했을 때, 80% 정제 수율이 보고되었다. 마지막으로 anion exchange 방법을 이용한 Mustang Q membrane filtration을 진행 했을 때, 97%의 정제 수율이 보고되었다 [39]. 단일 컬럼으로 정제를 진행하는 것은 여러 가지 단계를 통해 정제를 진행하는 것보다 공정과정이 적어 손실되는 인터페론 베타의 양은 작지만, 정제 수율은 낮아진다는 단점이 있다.


3. CONCLUSION

재조합 인간 인터페론 베타는 다발성경화증의 치료에 임상적으로 사용되고 있다. 이 단백질의 유용성은 여러 논문과 임상을 통해 밝혀져 있으며, 여러 다른 질환에도 시험되고 있다. 현재 치료용 단백질의 50% 이상이 진핵세포 발현 시스템을 이용하여 생산되고 있으며, 재조합 인간 인터페론 베타의 생산에서도 HEK 293, BHK-21, CHO, 쥐 골수종 림프구 세포 등이 사용된다. 이러한 생산방식은 단백질 번역 후 변형 시스템의 포함으로 인하여 치료용 단백질 발현에 적합하다. 그러나, 이 시스템은 수율이 낮고 세포의 성장이 느려 재조합 인간 인터페론 베타를 산업적으로 생산하는데 비용이 많이 든다는 단점을 가지고 있다. 이러한 문제점을 극복하기 위해, 대장균 발현 시스템을 이용하여 재조합 인간 인터페론 베타를 생산하는 것이 바람직하다. 그러나, 대장균 발현 시스템은 단백질 번역 후 변형의 부재, 재조합 인터페론 베타의 낮은 생물학적 활성 등의 몇 가지 단점이 존재한다. 특히, 재조합 인간 인터페론 베타의 과발현 시에는 단백질 이상 접힘 및 응집으로 inclusion body가 형성된다. 이와 같은 문제점들의 해결방법으로 효모를 이용한 인간 인터페론 베타 생산방법을 사용할 수 있으며 N-glycosylation의 존재로 인해 효과적인 방법이 될 수 있을 것이다. 따라서, 재조합 단백질 발현시스템의 선택은 완제품의 품질 및 생산량과의 긴밀한 연관성을 주시하여 선택하여야 한다. 이 균형은 재조합 인간 인터페론 베타의 생산 과정을 설계할 때 또한 주의 깊게 유지되어야 하며, 이는 비용 효율적인 치료법의 개발을 위한 토대가 될 수 있다.

Acknowledgments

This research was financially supported by the Ministry of Education (MOE) and National Research Foundation of Korea (NRF) through the Human Resource Training Project for Regional Innovation (No. 2015H1C1A1035529).

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Fig. 1.

Fig. 1.
Illustration of a typical process to develop mammalian and E. coli cell line for recombinant protein manufacturing.

Table 1.

8 types of multiple sclerosis medicines approved by the FDA

Name of medicines Brand (pharmaceutical agent) Recommended dose Frequency of dosing Injection method
Interferon beta-1a Avonex (Biogen Idec) 0.033 mg Once a week Intramuscular injection
Interferon beta-1a Rebif (Pfizer) 0.022 or 0.044 mg 3 times a week Subcutaneous injection
Interferon beta-1b Betaseron (Bayer) 0.25 mg Every other day Subcutaneous injection
Interferon beta-1b Extavia (Novartis) 0.25 mg Every other day Subcutaneous injection
Glatiramer acetate Copaxone (Teva) 20 mg Once every day Subcutaneous injection
Mitoxantrone Novantrone (EMD Serono) 5 to 12 mg/m2 Once every 3 months,
for 5 to 15 minutes infusion
intravenous injection
Natalizumab Tysabri (Biogen Idec) 300 mg Once every four weeks,
one hour infusion
intravenous injection
Fingolimod Gilenya (Novartis) 0.5 mg Once every day oral administration

Table 2.

Examples of Strategies for Engineering of Therapeutic Proteins

Issue Addressed Engineering Strategy
Lack of
posttranslational
modifications
in E. coli
Glycosylation Expression without the glycosylation (only if the biological activity is not impaired)
Mutation of residues on the surface to create more soluble protein
Mutation of glycosylation sites to cysteines to allow subsequent glycosylation in vitro
Proteolytic maturation Expression in two separate strains or cleavage of the precursor in vitro
Disulfide bridge formation Expression in the periplasmic space
Protein stability Decreasing number of free cysteine residues by mutation to alanine
Deletion of the hydrophobic region
Modulation of protein activity Design of the rapid-acting or long-acting protein version
Enhanced activity by improved affinity to the target molecule
Design of protein consisting of a consensus sequence

Table 3.

Immunoaffinity purification of human IFN- β from MEIF-CHO cells

Specimen Volume
(ml)
IFN activity
(units)
Protein
(mg)
Specific activity
(units/mg protein)
Yield
(%)
*MEIF-CHO cell : After insertion of the human IFN gene into the pSVEIF vector, it was transfected into CHO cells, and then selected into clones resistant to methotrexate.
*McAb : monoclonal antibodies
Blue-sepharose eluate (40% propyleneglycol) 70 280×106 36.7 7.6×106 100
Loaded on McAb column after ultrafiltration 20 220×106 12.6 1.75×107 79
McAb eluate (pH 2) 5 200×106 0.41 4.9×108 82